T载体，全称为蓝白T载体（lue-WhiteVectorT），是分子生物学实验中常用的克隆载体。它是克隆CR扩增产物不可或缺的工具，尤其在构建基因表达载体和基因编辑等领域发挥着重要作用。
T载体具有以下特点：
高保真性：确保插入的基因序列稳定，减少突变。
线性结构：便于与目的基因连接，提高转化效率。
易于筛选：通过蓝白斑筛选法，快速鉴定转化成功的细胞。使用限制酶EcoRI和KnI酶切质粒UC57和目的基因，回收大片段。
在0.2mL微量离心管中制备连接反应液：1µL10×T4DNALigaseuffer，约0.2mol目的片段，约0.02mol的载体骨架，0.5µLT4DNA连接酶。
将连接产物转化感受态细胞Dα。转化方法包括热激法和电转化法。
转化后，通过抗生素筛选来鉴定阳性克隆。在CR扩增时选择合适的引物，并进行严格的实验控制，以确保插入的基因没有发生突变。
通常选择大肠杆菌作为宿主细胞，因为它们易于培养且转化效率高。
3.1CR扩增及克隆3同源臂和5同源臂：
设计上下游引物，以牛全血基因组DNA为模板，进行CR扩增。
3同源臂和5同源臂的扩增产物分别连接到MD20-TVector载体上。
转化感受态细胞Dα，抽提质粒，经酶切及测序鉴定。3.23、5同源臂插入打靶： 将3同源臂和5同源臂插入到打靶载体中，构建ON载体。
目的基因被克隆到ET质粒载体上：
受噬菌体T7强转录及翻译信号控制。
表达由宿主细胞提供的T7RNA聚合酶诱导。AD终止子：用于终止转录。
T7终止子：用于体外转录的终止。表位标签： c-Myc表位标签：便于使用抗体进行检测。
2μori：确保在酵母中稳定复制。科研人员采用影印法筛选含有目的基因的大肠杆菌，即使用无菌的线毡布压在培养基上，带出少部分菌落。
通过以上步骤，可以成功构建T载体转化大肠杆菌，为基因克隆、表达和编辑等领域提供有力支持。